专利名称：软肝中药制剂及其制备和检测方法
技术领域：
本发明属于药品技术领域，涉及一种治疗原发性肝癌引起的腹水、黄疸、胁痛等症状的药物，具体是以中药材为原料制成的软肝中药制剂，同时涉及该药物的制备和检测方法。
背景技术：
原发性肝癌(Primary Liver Cancer, PLC)是指发生在肝细胞或肝内胆管细胞的癌肿，是世界最常见且恶程度最高的肿瘤之一。其发病率在恶性肿瘤中位居世界第5位，死亡率位居第3位。我国布近2亿人感染乙肝病毒，部分人将衍变成肝硬化，甚至肝癌，所以我 国为原发性肝癌高发区，其中肝细胞癌占原发性肝癌中的绝大多数，胆管细胞癌不足5%。典型的肝癌病人可出现肝区疼痛，上腹部包块，消瘦等症状，伴有肝硬化的病人常有肝功能障碍、黄疸、腹痛及腹水等症状。肝癌发病隐匿，早期难以发现，80%以上的患者确诊时已届中晚期，且多数合并有肝炎、肝硬化背景，肝脏储备功能不良而丧失手术机会。因此，首次就诊的患者，手术切除率不足30%，且肝痛术后复发率高达47 82 %。肝癌复发转移是多因素参与的复杂过程，也是肝癌死亡率居高不下的主要原因。在世界上多数有经验的肝癌治疗中心，肝癌肝切除术的5年生存率为25% 50%。对于中晚期肝癌患者，放化疗均不敏感，预后很差，中数生存期为3 6个月，5年生存率仅为2. 8 3%。近20年来，由于放射介入治疗的迅速发展,肝动脉化疗栓塞术(TACE, Transcatheter arterial chemoembolization)成为治疗原发性肝癌主要的非手术疗法，由于其疗效明显，该技术已在全国广泛开展。但是，TACE的广泛使用并未能明显改善原发性肝癌的5年生存率，TACE造成的肝功能损害，是影响治疗效果的重要因素之一。此外，随着射频消融、微波、冷冻等微创治疗技术的发展，肝癌治疗相关的毒副反应减少，安全性进一步提高，但治疗引起的肝功能损害依然存在。肝功能损害，既是疾病的演变结果，也是影响疾病预后和治疗效果的重要因素之一。目前已有一些治疗药物，尤其是西药，如甲苯磺酸索拉非尼片等，但是西药昂贵且毒副作用明显。而作为传统药物，中药在抗癌方面具有一定优势。目前已有一些中药制剂用于治疗肝癌的报道(CN1266703A、CN1552434A、CN1739771A、CN102091302A、CN102114136A、CN102441053A、CN101708272A、CN1679899A、CN102302663A、CN102188638A、CN101972448A、CN101559124A)，但是仍存在不少问题一是药物构成中毒性药物的用量较大，所以毒副作用较大；二是药物成分较多，药理不清楚；三是生产工艺比较复杂，成本较高，也不易控制产品质量。周岱翰等研究了以人参、桃仁等组成的参桃软肝丸(参桃软肝丸抑制人肝癌细胞增殖及增强LAK抑瘤活性的试验研究，中西医结合肝病杂志，2001年，第11卷第I期，30-32 ;参桃软肝丸抗大鼠肝纤维化的试验研究，中医药学刊，2003年4月，第21卷第4期，519-520 ;参桃软肝丸对肿瘤生长及T淋巴细胞亚群的影响，肿瘤防治杂志，2002年6月，第9卷第3期，241-243)，并通过细胞和动物实验验证了对肝癌具有较好的治疗效果，但是该药物还存在以下不足之处一是效果不够稳定；二是制作工艺水平较低；；三是剂型相对单一，仅是丸剂，服药不方便。因此，进一步开发新的治疗原发性肝癌的中药复方是很有必要的。

发明内容
本发明的目的是提供一种治疗原发性肝癌的中药制剂；本发明的另一目的是提供该中药制剂的制备方法；本发明的第三个目的是提供该制剂的鉴别和检测方法。本发明目的是通过如下技术方案实现本发明药物组合物的原料组成如下生晒参、桃仁、仙鹤草、当归、生大黄、丹参、发酵虫草菌粉和人工牛黄。其配比如下
生晒参50-300重量份桃仁50-300重量份
仙鹤草250-500重量份当归50-300重量份
生大黄50-300重量份丹参50-300重量份
发酵虫草菌粉10-100重量份
人工牛黄10-50重量份上述配比优选为
生晒参100-220重量份桃仁100-250重量份
仙鹤草300-350重量份当归150-200重量份
生大黄100-180重量份丹参120-200重量份
发酵虫草菌粉30-70重量份
人工牛黄10-30重量份上述配比进一步优选为
生晒参120-180重量份桃仁120-200重量份
仙鹤草310-350重量份当归150-180重量份
生大黄120-180重量份丹参120-170重量份
发酵虫草菌粉 45-70重量份
人工牛黄10-15重量份上述配比更优选为生晒参150重量份桃仁150重量份
仙鹤草338重量份当归150重量份
生大黄150重量份丹参150重量份发酵虫草菌粉 50重量份
人工牛黄12. 5重量份上述发酵虫草菌粉也可以直接使用冬虫夏草。上述原材料应符合《中国药典》2010年版一部有关药物项下要求。①生晒参五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根和根莖。按《中国 药典》2010年版一部正文8页人参项下进行质量检验,药材质量合格。②当归伞形科植物当归Angelica sinensis (Oliv. )Diels的干燥根。按《中国药典》2010年版一部正文124-125页当归项下进行质量检验，药材质量合格。③丹参唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖。按《中国药典》》2010年版一部正文70-71页丹参项下进行质量检验,药材质量合格。④仙鹤草蔷薇科植物龙牙草Agrimonia pilosa Lebeb.的干燥地上部分。按《中国药典》2010年版一部正文94-95页仙鹤草项下进行质量检验，药材质量合格。⑤生大黄寥科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheumtanguticum ; Maxim, ex Balf.或药用大黄 Rheum officinale Baill.的干燥根和根莖。按《中国药典》2010年版一部正文22-23页大黄项下进行质量检验，药材质量合格。⑥桃仁蔷薇科植物桃Prunus persica (L. ) Batsch或山桃Prunusdavidiana(Carr. )Franch.的干燥成熟种子。按《中国药典》2010年版一部正文260-261页桃仁项下进行质量检验，药材质量合格。⑦发酵虫草菌粉为发酵麦冬虫夏草菌C8-CQ80中华被毛孢Hirsutellasinensis Liu, Guo, Yu et Zeng(1989)经液体深层发酵所得菌丝体的干燥粉末。按《中国药典》2010年版一部正文106页冬虫夏草项下进行质量检验，药材质量合格。⑧人工牛黄由牛胆粉、胆酸、猪去氧胆酸、牛磺酸、胆红素、胆同醇、微量元素等加工制成。按《中国药典》2010年版一部正文5-7页人工牛黄项下进行质量检验，药材质量合格。上述中药制剂的制备工艺为(a)取生晒参、桃仁、当归、仙鹤草、丹参、生大黄6味药材洗净并除去杂质；(b)生晒参、丹参、当归用7-10倍量75%醇回流提取2_3次，每次1_2小时，提取液滤过合并，回收乙醇浓缩至适量；(c)生晒参、丹参、当归醇提后药渣与生大黄、桃仁、仙鹤草3味药合并分别浸泡O. 5-1小时，煎煮3次，依次为9、7、7倍量水，每次I. 5小时，滤过，合并滤液浓缩后与上述醇提浓缩液合并；(d)喷雾干燥，粉碎制得干浸膏粉；(e)在干浸膏粉中加入冬虫夏草或发酵虫草菌粉和人工牛黄细粉混匀；(f)按药物制剂常规方法制粒，干燥。
上述中药制剂的制备工艺优选为(a)取生晒参、桃仁、当归、仙鹤草、丹参、生大黄6味药材洗净并除去杂质；(b)生晒参、丹参、当归用7-10倍量75%醇回流提取2_3次，每次1_2小时，提取液滤过合并，回收乙醇浓缩至适量；(c)生晒参、丹参、当归醇提后药渣与生大黄、桃仁、仙鹤草3味药合并分别浸泡O. 5-1小时，煎煮3次，依次为9、7、7倍量水，每次I. 5小时，滤过，合并滤液浓缩后与上述醇提浓缩液合并；(d)喷雾干燥，粉碎制得干浸膏粉；(e)在干浸膏粉中加入发酵虫草菌粉(或冬虫夏草)和人工牛黄细粉混匀； (f)按药物制剂常规方法制粒，干燥。上述发酵虫草菌粉(或冬虫夏草)和人工牛黄优选过100目筛后与上述干浸膏粉混合，进一步优选过200目筛。上述药物可以制成各种制剂，包括其中丸剂、膏剂、丹剂、冲剂、口服液、胶囊、片
齐 、注射剂等。优选制备成胶囊。可通过现有制备方法与常用辅料制备成上述各种剂型。该药物服药方法以胶囊为例，每人每天口服胶囊三次，每次4粒，三周(21天)为一疗程，服用两个疗程。上述药物的鉴别方法包括下列方法中的一种或几种I.制备供试品溶液取本品药物用氯仿萃取，超声处理并滤过，滤渣加甲醇，滤过，滤液浓缩，过中性氧化铝柱子，以甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解，用水饱和正丁醇溶液萃取，水洗，正丁醇液蒸干，加甲醇溶解，作为供试品溶液；制备对照药材溶液取人参对照药材，同法制备对照药材溶液；鉴别按照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，用展开剂展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.制备供试品溶液取本品药物，加乙醇，超声处理并滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，取上清液作为供试品溶液；制备对照药材溶液取当归对照药材，加甲醇，超声处理并滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，取上清液作为对照药材溶液；鉴别按照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各，分别点于同一硅胶G薄层板上，用展开剂展开，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.制备供试品溶液取本品药物，加甲醇浸泡，振摇并滤过，滤液作为供试品溶液；制备对照药材溶液取丹参对照药材，加甲醇浸泡，振摇并滤过，滤液作为对照药材溶液；鉴别按照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，用展开剂展开，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。4.制备供试品溶液取本品药物，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩，取上清液作为供试品溶液；制备对照药材溶液取大黄酸对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液。鉴别按照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，用展开剂展开，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色主斑点。上述药物的含量测定方法包括下列测定方法I.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-O. I %磷酸溶液为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。2.对照品溶液的制备取大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含大黄酚8ug的溶液，即得；3.测试品制备取本品药物，称定重量，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 4.测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10uL，注入液相色谱仪，测定；5.该药物制剂每粒含生大黄以大黄酚(C15H1004)计，不得少于O. Olmg。有益效果本发明的中药制剂制备工艺简单，性能良好，质量稳定，临床使用结果表明其具有以下优点I.本发明选用天然植物药作为原料，各组分符合药政法规定，利用各种药物活性成分综合治疗原发性肝癌，对人体毒害性较小。2.临床研究显示，本发明单独给药，或者辅助手术、化疗，介入微创等治疗手段，对肝癌具有显著的临床疗效，对于临床各种治疗手段失败的晚期癌症患者亦显示良好疗效，且具有养肝、护肝的作用，改善肝功能，是延长患者的生存期，可以取代副作用较大的西药和昂贵的进口药。3.本发明药物可以制备成多种剂型，方便给药。4.实验表明，本发明药物具有较好疗效，而毒副作用小，安全级别为I级，减少对身体伤害。


图I是最佳工艺流程2是颗粒的临界相对湿度
具体实施例方式(一 )提取工艺的研究以下工艺研究是针对下列组份和含量的组合物进行的生晒参150重量份桃仁150重量份
仙鹤草338重量份当归150重量份
生大黄150重量份丹参150重量份发酵虫草菌粉 50重量份
人工牛黄12. 5重量份I.醇提工艺考察当归、丹参、生晒参药效成分有脂溶性成分和水溶性多糖等，根据脂溶性有效成分及影响因素设计醇提实验，按L9 (34)正交表试验，正交实验安排及结果见表I表I醇提取部分因素
权利要求
1.一种治疗原发性肝癌的中药组合物，其组分和含量如下生晒参50-300重量份桃仁50-300重量份仙鹤草250-500重量份当归50-300重量份生大黄50-300重量份丹参50-300重量份 发酵虫草菌粉或冬虫夏草10-100重量份 人工牛黄10-50重量份。
2.根据权利要求I所述的治疗原发性肝癌的中药组合物，其组分和含量如下生晒参100-220重量份桃仁100-250重量份仙鹤草300-350重量份当归150-200重量份生大黄100-180重量份丹参120-200重*份 发酵虫草菌粉或冬虫夏草30-70重量份 人工牛黄10-30重量份。
3.根据权利要求I所述的治疗原发性肝癌的中药组合物，其组分和含量如下生晒参120-180重量份桃仁120-200重量份仙鹤草310-350重量份当归150-180重量份生大黄120-180重量份丹参120-170重童份 发酵虫草菌粉或冬虫夏草45-70重量份 人工牛黄10-15重量份。
4.根据权利要求I所述的治疗原发性肝癌的中药组合物，其组分和含量如下下 生晒参150重量份桃仁150重量份仙鹤草338重量份当归150重量份生大黄150重量份丹参150重量份 发酵虫草菌粉或冬虫夏草50重量份 人工牛黄12.5重量份。
5.根据权利要求1-4所述的治疗原发性肝癌的中药组合物的制备方法，其步骤如下 取生晒参、桃仁、当归、仙鹤草、丹参、生大黄6味药材洗净并除去杂质；生晒参、丹参、当归用7-10倍量65% -85%乙醇回流提取1-3次，每次O. 5-2小时，提取液滤过合并，回收乙醇浓缩至适量；生晒参、丹参、当归醇提后药渣与生大黄、桃仁、仙鹤草3味药合并分别浸泡O. 5-1小时，煎煮3次，依次为9、7、7倍量水，每次I. 5小时，滤过，合并滤液浓缩后与上述醇提浓缩液合并；喷雾干燥，粉碎制得干浸膏粉；在干浸膏粉中加入发酵虫草菌粉(或冬虫夏草)和人工牛黄细粉混匀；按药物制剂常规方法制粒，干燥。
6.根据权利要求1-4所述的治疗原发性肝癌的中药组合物的制备方法，其步骤如下(a)取生晒参、桃仁、当归、仙鹤草、丹参、生大黄6味药材洗净并除去杂质； (b)生晒参、丹参、当归用7-10倍量75%醇回流提取2-3次，每次1_2小时，提取液滤过合并，回收乙醇浓缩至适量； (c)生晒参、丹参、当归醇提后药渣与生大黄、桃仁、仙鹤草3味药合并分别浸泡O.5-1小时，煎煮3次，依次为9、7、7倍量水，每次I. 5小时，滤过，合并滤液浓缩后与上述醇提浓缩液合并； (d)喷雾干燥，粉碎制得干浸膏粉； (e)在干浸膏粉中加入发酵虫草菌粉(或冬虫夏草)和人工牛黄细粉混匀； (f)按药物制剂常规方法制粒，干燥。
7.根据权利要求1-4所述的治疗原发性肝癌的中药组合物的鉴别方法，其步骤如下 方法一制备供试品溶液取本品药物用氯仿萃取，超声处理并滤过，滤渣加甲醇，滤过，滤液浓缩，过中性氧化铝柱子，以甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解，用水饱和正丁醇溶液萃取，水洗，正丁醇液蒸干，加甲醇溶解，作为供试品溶液； 制备对照药材溶液取人参对照药材，同法制备对照药材溶液； 鉴别按照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，用展开剂展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；方法二 制备供试品溶液取本品药物，加乙醇，超声处理并滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，取上清液作为供试品溶液； 制备对照药材溶液取当归对照药材，加甲醇，超声处理并滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，取上清液作为对照药材溶液； 鉴别按照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各，分别点于同一硅胶G薄层板上，用展开剂展开，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的突光斑点； 方法三制备供试品溶液取本品药物，加甲醇浸泡，振摇并滤过，滤液作为供试品溶液； 制备对照药材溶液取丹参对照药材，加甲醇浸泡，振摇并滤过，滤液作为对照药材溶液； 鉴别按照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，用展开剂展开，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 方法四制备供试品溶液取本品药物，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩，取上清液作为供试品溶液； 制备对照药材溶液取大黄酸对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液； 鉴别按照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，用展开剂展开，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色主斑点。
8.根据权利要求1-4所述的治疗原发性肝癌的中药组合物的含量测定方法，其步骤如下 (I)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-O. I %磷酸溶液为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000 ； (2).对照品溶液的制备取大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含大黄酚8ug的溶液，即得； (3).测试品制备取本品药物，称定重量，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (4).测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10uL，注入液相色谱仪，测定； (5).该药物制剂每粒含生大黄以大黄酚(C15H1004)计，不得少于O.Olmg。
9.根据权利要求1-4所述的治疗原发性肝癌的中药组合物的制剂，其为丸剂、膏剂、丹齐U、冲剂、口服液、胶囊、片剂或注射剂，优选为胶囊。
10.根据权利要求1-4所述的中药组合物在制备治疗原发性肝癌药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及软肝中药制剂及其制备和检测方法。该药由生晒参、桃仁、当归、仙鹤草、丹参、生大黄、冬虫草或发酵冬虫夏草菌丝粉、人工牛黄组成。制备方法为生晒参、丹参、当归用乙醇提取，醇提后药渣与生大黄、桃仁、仙鹤草3味药合并浸泡、煎煮，合并滤液浓缩后与醇提浓缩液合并制得干浸膏粉；加入冬虫夏草或发酵虫草菌粉和人工牛黄细粉混匀；制粒，干燥，制得药物。鉴别方法包括人参、生大黄、当气归、丹参的薄层色谱法试验；含量测定方法包括HPLC法测定大黄酚含量，规定每粒胶囊中含生大黄按大黄酚(C15H10O4)计，不得少于0.01mg。本发明确定了最佳工艺路线和工艺条件，使工艺更稳定，药效更强。
文档编号G01N30/90GK102872231SQ20121037087
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月29日 优先权日2012年9月29日
发明者周岱翰 申请人:周岱翰