专利名称：呋喃妥因代谢物检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及呋喃妥因代谢物检测试剂盒。
背景技术：
硝基呋喃类药物是人工合成的广谱抗生素,它有非常好的抗菌作 用和药动力学的特性，曾经被广泛应用作为家畜、家禽、人工养殖水 产品的促生长添加剂。但通过长期的实验室研究发现,硝基呋喃类药 物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变,并由此推断，人 类长期使用该类药物或长期食用添加该类促生长剂的家畜、家禽、人 工养殖水产品，同样也可发生癌变和基因突变。所以此类药物禁止在 治疗和饲料中使用。
我国于2002年颁布了禁止使用硝基呋喃类抗生素的禁令，在农 业部发布的193号公告的《食品动物禁用兽药及其他化合物清单》中，
硝基呋喃类抗生素在所有食品动物和所有用途中都被禁止使用。
欧盟委员会于2003年通过了 2003/181/EC委员会决议，建立了用
于检测禽肉产品和水产品中硝基呋喃类药物的代谢物的各种方法的 最小要求性能限值(Minimum Required Performance Limits, MRPL) 为lug/kg，欧盟从第三国进口的动物性产品中硝基呋喃类药物的代谢物的含量不得超过1 U g/kg。 2004年美国FDA公布了禁止在进口动 物源性食品中使用的ll种药物名单，其中包括呋喃妥因。因此，为确 保动物源性食品的安全和对外出口贸易的发展，建立准确可靠，灵敏 度高的定性定量方法是十分必要的。
由于呋喃妥因在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产 物(AHD)则能存留较长的一段时间，所以在分析此类药物的残留时经 常要分析其代谢后的产物，检测监管部门就以检测代谢产物为手段达 到检测呋喃妥因残留的目的。
国内外现已开发出检测呋喃妥因的酶联免疫试剂盒，但是现在国 内大部分需求是从国外进口的，国内生产的试剂盒在准确性、灵敏度、 特异性等方面还不能优于进口试剂盒。

发明内容
为了克服现有技术中存在的上述缺陷。
本发明提供一种检测呋喃妥因代谢物(AHD)的酶联免疫试剂 盒，包括有包被呋喃妥因代谢物衍生物抗原的酶联板与酶标记呋喃 妥因代谢物衍生物特异性抗体或包被呋喃妥因代谢物衍生物特异性 抗体的酶联板与酶标记呋喃妥因代谢物衍生物抗原；所述呋喃妥因代 谢物衍生物抗原是采用活性酯法将呋喃妥因代谢物衍生物半抗原与 载体蛋白进行偶联得到的。
上述载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、兔血清蛋白、人血 清白蛋白、人血纤维蛋白或血蓝蛋白。
权利要求
1.一种呋喃妥因代谢物检测试剂盒，包括有包被呋喃妥因代谢物衍生物抗原的酶联板与酶标记呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体或包被呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体的酶联板与酶标记呋喃妥因代谢物衍生物抗原；所述呋喃妥因代谢物衍生物抗原是采用活性酯法将呋喃妥因代谢物衍生物半抗原与载体蛋白进行偶联得到的。
2. 根据权利要求1所述的呋喃妥因代谢物检测试剂盒，其特征 在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、兔血清蛋白、人 血清白蛋白、人血纤维蛋白或血蓝蛋白。
3. 根据权利要求1所述的呋喃妥因代谢物检测试剂盒，其特征 在于，所述酶联板是以聚苯乙烯、纤维素、聚丙烯酰胺、聚乙烯、聚 丙烯、交联葡聚糖、玻璃、硅橡胶或琼脂糖凝胶为载体，用pH值9. 6、 0.05mol/L、含有0.59iv/v甲醇的碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，含 有8%-15%w/v的脱脂奶和l%w/v惰性蛋白的溶液作为封闭液制备而成 的。
4. 根据权利要求1所述的呋喃妥因代谢物检测试剂盒，其特征 在于，所述酶联板的制备方法如下(l)用包被缓冲液将呋喃妥因代谢物衍生物半抗原与载体蛋白偶 联物或抗抗体以0. 02-0. 084g/ml浓度稀释成抗原稀释液或抗体稀释 液；(2)向酶联板的每孔中加入已经稀释好的抗原稀释液或抗 抗体稀释液，37'C温育2h，倾去包被液，用洗涤液洗涤4次，每次 15-30s，拍干；(3)向酶联板的每孔中加入150-200W封闭液，37'C温育l-2h， 倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封保存。
5. 根据权利要求1所述的呋喃妥因代谢物检测试剂盒，其特征 在于，所述酶为过氧化物酶或半乳糖甘酶。
6. 根据权利要求1所述的呋喃妥因代谢物检测试剂盒，其特征 在于，所述酶标记呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体是采用戊二醛法 进行偶联制得。
7. 根据权利要求1所述的呋喃妥因代谢物检测试剂盒，其特征 在于，所述酶标记抗原是采用戊二酸法将标记酶与呋喃妥因代谢物半 抗原进行偶联得到。
8. 根据权利要求1所述的呋喃妥因代谢物检测试剂盒，其特征 在于，所述呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体为鼠源单克隆抗体或兔 源多克隆抗体。
9.据权利要求1所述的呋喃妥因代谢物检测试剂盒，其特征在 于，所述试剂盒还包含呋喃妥因代谢物衍生物标准品溶液、底物显色 液、终止液、浓縮洗涤液和浓縮复溶液。
10.据权利要求9所述的呋喃唑酮代谢物检测试剂盒，其特征在 于，所述底物显色液为单底物液。
全文摘要
本发明涉及呋喃妥因代谢物检测试剂盒。本发明提供一种检测呋喃妥因代谢物的酶联免疫试剂盒，包括有包被呋喃妥因代谢物衍生物抗原的酶联板与酶标记呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体或包被呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体的酶联板与酶标记呋喃妥因代谢物衍生物抗原；所述呋喃妥因代谢物衍生物抗原是采用活性酯法将呋喃妥因代谢物衍生物半抗原与载体蛋白进行偶联得到的。本发明提供的试剂盒内生产的试剂盒使用方便，而且在准确性、灵敏度、特异性等方面均性能良好。
文档编号G01N33/577GK101526529SQ20091004516
公开日2009年9月9日 申请日期2009年1月12日 优先权日2009年1月12日
发明者青 吴, 俊 唐, 成 李, 宏 杨, 杨宗繁, 温俊梅, 聂继斌, 欣 齐 申请人:深圳市绿诗源生物技术有限公司